Stage de M1 | Etablissement de caryotypes et co-localisation de gènes de la reproduction par cytogénétique chez l’huître creuse Crassostrea gigas

02 nov 2015

Ce stage a déjà été attribué

Responsables et lieu de stage 

Christophe LELONG et Anne-Sophie MARTINEZ

UMR BOREA "Biologie des ORganismes et Ecosystèmes Aquatiques" MNHN, UPMC, UCBN, CNRS-7208, IRD-207, UNICAEN – Equipe 2 - Université de Caen - Normandie, Institut de Biologie Fondamentale et Appliquée

emails : christophe.lelong @unicaen.fr ; anne-sophie.martinez @unicaen.fr

Problématique

Si nous disposons actuellement d’un nombre important de données moléculaires concernant la reproduction chez l’huître Crassostrea gigas, les mécanismes cytogénétiques sont peu étudiés, alors qu’ils sont indispensables pour mieux comprendre certains des processus associés à ce mécanisme physiologique.

L’huître est un hermaphrodite successif. Les connaissances sur son déterminisme sexuel progressent; de nombreux marqueurs moléculaires ont été caractérisés. Mais on ne sait pas encore si ces marqueurs du sexe sont positionnés sur un ou plusieurs locus(i) chromosomiques et, selon le cas, s’ils pourraient être régulés en cluster.

L’huître est également très plastique d’un point de vue chromosomique. Sa production repose actuellement sur l’utilisation d’animaux naturellement diploïdes mais aussi d’animaux triploïdes, qui pourraient présenter des stratégies de reproduction différentes. L’huître peut même être aneuploïde et mosaïque, c’est-à-dire présenter, dans certaines cellules, un gain ou une perte de chromosomes. Cette plasticité  chromosomique pourrait entrainer un déséquilibre du nombre d’allèles pour des gènes majeurs de la reproduction.

Objectifs du stage et résultats attendus

Ce stage de Master 1 a donc pour objectifs d’établir des caryotypes chez l’huître creuse Crassostrea gigas afin d’étudier la co-localisation de gènes de la reproduction par cytogénétique. Actuellement, les caryotypes chez l’huitre sont établis à partir d’embryons ou de branchies. Lors de ce stage, une mise au point de caryotypes sera développée sur les tissus gonadiques pour permettre de montrer l’aneuploïdie et le mosaïcisme chez les huitres triploïdes, en relation avec la gamétogenèse (histologie quantitative en parallèle). Le développement de la technique de (Dual)-FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) permettra de (co)-localiser des gènes choisis afin d’obtenir des cartographies plus fines chez l’huître et la synténie de clusters de gènes impliqués dans la reproduction et le déterminisme sexuel. La méthodologie d’étirement chromatinien couplé au FISH (Fiber-FISH) sera entreprise en parallèle. Cette approche sera menée sur des gènes majeurs déjà caractérisés chez l’huître, comme Foxl2, soxE, β-caténine et Dsx pour le déterminisme sexuel et glypican dally, htra1, bmp2 like et pthr pour les huitres diploïdes et triploïdes.

Techniques 

- Etablissement de caryotypes sur différents tissus

- Synthèse et marquage de sondes par Nick Translation

- (Dual)-FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) sur chromosomes

- Fiber-FISH (ou peignage moléculaire sur la chromatine décondensée)